Kvalitén hos SLC-selekterad hingstsperma
mitokondriella membranpotentialen och produktion av ROS
Studiens målsättning var att utvärdera kvalitén hos hingstsperma selekterad med hjälp av Single Layer Centrifugation (SLC), med huvudsyftet att studera den mitokondriella membranpotentialen (??m) och förekomsten av reaktiva syreföreningar (ROS) hos hingstspermier före och efter SLC. Ett insemineringsförsök med SLC selekterad och rutinspädd sperma genomfördes även på ett litet antal ston, men inga slutsatser kunde dras av resultaten.
Humanstudier har visat att spermier med låg ??m mer frekvent har återfunnits hos män med fertilitetsproblem. Mätning av ??m har gjorts genom att tillsätta den lipofila JC-1, vilket i både studier på både humana- och ekvina spermier har visat sig vara en känslig metod för att särskilja spermier med låg respektive hög ??m. Det har även visats att förekomsten av ROS bidrar till en fientlig miljö för spermierna och leder till förkortad överlevnadstid.
I denna studie har förekomsten av superoxid och väteperoxid (ROS) i hingstsperma studerats genom att tillsätta divätedichlorofluoresceindiacetat (H2DCFDA) och hydroethidine (HE). Både ??m och förekomsten av ROS har studerats med flödescytometri. Ejakulat från 14 hingstar samlades på tre seminstationer, späddes enligt standardrutin och transporterades sedan till Institutionen för kliniska vetenskaper, avd. för reproduktion, SLU, där SLC utfördes enligt en rutinmetod.
Resultatet från denna studie visade att även om JC-1 är en känslig metod för att detektera låg/hög mitokondriell membranpotential (??m) visade den inte på någon korrelation med andra metoder som används för att bedöma spermiekvalité. Sperma med signifikant högre motilitet och längre överlevnad visade ingen skillnad i ??m jämfört med spermier med sämre motilitet. Centrifugeringen påverkade inte ??m men skillnader sågs mellan hingstarna. Vidare visades att SLC-metoden selekterar för spermier med signifikant lägre väteperoxidproduktion. Fler studier behöver göras för att finna orsaken till varför SLC-selekterade spermier uppvisar en signifikant förändrad ROS-produktion.