Tillverkning av terapeutiska glykoproteiner

Sammanfattning

Marknaden för terapeutiska proteiner kan grovt delas in i 2 områden: de

proteiner som inte modifieras efter translationen och de som kräver

posttranslationell modifiering (bl a glykosylering) för att vara biologiskt

aktiva. Eprex®: humant rekombinant erytropoietin är ett glykoprotein som

används vid anemi, det stimulerar mitos och differentiering av stamceller i

benmärgen till mogna erytrocyter. Erytropoietin är bara ett av många

läkemedel för humant bruk som tillverkas i mammalieceller. Mammalieceller

är de som är lämpligast att använda som uttryckssystem för terapeutiska

glykoproteiner tänkta för humant bruk. Detta eftersom de innehåller de

organeller och enzym som krävs för att erhålla korrekt proteinkonformation

och utföra avancerade posttranslationella modifikationer.

Jäst, insektsceller och andra lägre eukaryota organismer glykosylerar sina

proteiner, men inte på ett humanlikt sätt. Bakterien Escherichia coli

(E.coli) är ett vanligt uttryckssystem då glykosylering av proteinet inte är

nödvändigt för funktionen, som exempel kan nämnas insulinet Humulin®. Man

har länge trott att bakterier inte kan glykosylera proteiner, men nyligare

bevis tyder på motsatsen. Uttryckssystem såsom mammalieceller, jäst,

insekter, växter och bakterier har alla sina styrkor men även svagheter när

det gäller produktion av terapeutiska glykoproteiner för humant bruk. Försök

har gjorts att humanisera den nödvändiga glykosyleringen i de olika

uttryckssystemen.

Syftet med denna studie har varit att ta reda på vad terapeutiska

glykoproteiner är, vilka funktioner de har samt hur de kan tillverkas i

olika uttryckssystem.

Litteratur söktes i olika databaser över vetenskapliga artiklar. I den

laborativa delen producerades glykoproteinet PSGL1-mIgG2b med jästen Pichia

Pastoris i bioreaktor. Analyser av produktivitet och kvalitet av

glykoproteinet utfördes med ELISA och western blot. Denna laboration

dokumenterades i en separat rapport med format enligt vetenskapliga

rapporter. En översikt över denna laboration ingår även i denna rapport.

Resultatet av detta arbete visar att mammalieceller fortfarande är det

ledande uttryckssystemet för terapeutiska glykoprotein, men att det redan

och även i framtiden kommer att få konkurrens av system såsom jäst- och

växtceller.