Tillverkning av terapeutiska glykoproteiner
Marknaden för terapeutiska proteiner kan grovt delas in i 2 områden: de proteiner som inte modifieras efter translationen och de som kräver posttranslationell modifiering (bl a glykosylering) för att vara biologiskt aktiva. Eprex®: humant rekombinant erytropoietin är ett glykoprotein som används vid anemi, det stimulerar mitos och differentiering av stamceller i benmärgen till mogna erytrocyter. Erytropoietin är bara ett av många läkemedel för humant bruk som tillverkas i mammalieceller. Mammalieceller är de som är lämpligast att använda som uttryckssystem för terapeutiska glykoproteiner tänkta för humant bruk. Detta eftersom de innehåller de organeller och enzym som krävs för att erhålla korrekt proteinkonformation och utföra avancerade posttranslationella modifikationer. Jäst, insektsceller och andra lägre eukaryota organismer glykosylerar sina proteiner, men inte på ett humanlikt sätt. Bakterien Escherichia coli (E.coli) är ett vanligt uttryckssystem då glykosylering av proteinet inte är nödvändigt för funktionen, som exempel kan nämnas insulinet Humulin®. Man har länge trott att bakterier inte kan glykosylera proteiner, men nyligare bevis tyder på motsatsen. Uttryckssystem såsom mammalieceller, jäst, insekter, växter och bakterier har alla sina styrkor men även svagheter när det gäller produktion av terapeutiska glykoproteiner för humant bruk. Försök har gjorts att humanisera den nödvändiga glykosyleringen i de olika uttryckssystemen. Syftet med denna studie har varit att ta reda på vad terapeutiska glykoproteiner är, vilka funktioner de har samt hur de kan tillverkas i olika uttryckssystem. Litteratur söktes i olika databaser över vetenskapliga artiklar. I den laborativa delen producerades glykoproteinet PSGL1-mIgG2b med jästen Pichia Pastoris i bioreaktor. Analyser av produktivitet och kvalitet av glykoproteinet utfördes med ELISA och western blot. Denna laboration dokumenterades i en separat rapport med format enligt vetenskapliga rapporter. En översikt över denna laboration ingår även i denna rapport. Resultatet av detta arbete visar att mammalieceller fortfarande är det ledande uttryckssystemet för terapeutiska glykoprotein, men att det redan och även i framtiden kommer att få konkurrens av system såsom jäst- och växtceller.