Odlingsmedium
Att ersätta fetalt kalvserum med ett kemiskt definierat substitut
SammanfattningProjektgrupp 14-X5 avser med denna rapport att ge avdelningen Bioreagens på Thermo Fisher Scientific ett underlag för att på sikt kunna byta ut fetalt kalvserum (FCS) mot ett kemiskt definierat suplement vid odling av mushybridomceller för produktion av monoklonala antikroppar. Thermo Fisher Scientific är ett världsomspännande bioteknikföretag som utvecklar blodtestsystem som stöd för klinisk diagnos och uppföljning av allergier, astma och autoimmuna sjukdomar.Fetalt kalvserum är en tillsats i många odlingsmedier som ofta är nödvändig för att cellerna ska växa. Det finns dock många problem med FCS. Det är en biprodukt av köttindustrin och produceras på ett etiskt tveksamt sätt, variation mellan olika batcher förekommer och då det är en animalisk produkt finns en risk för kontamination av bland annat bakterier, virus och prioner. Av dessa anledningar vill man byta ut FCS mot ett kemiskt definierat, serumfritt supplement. Vi har utrett vilka ämnen eller grupper av ämnen som har störst potential att vara bra substitut för FCS, samt rangordnat dessa. Genom våra artikelstudier har vi kommit fram till att man kan dela in alternativen i tre grupper: lipider, tillväxtfaktorer och små biomolekyler. Bland lipiderna är det linol- och oljesyra som i flera artiklar har visats ha god effekt på både celltillväxt och antikroppsproduktion. Kolesterol har även visats ha positiva effekter. Tillväxtfaktorerna som har valts är epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF), interleukin-2 (IL-2) och interleukin-6 (IL-6). Dessa har främst en positiv effekt på cellernas antikroppsproduktion. Bland de små biomolekyler som har valts ut finns en mängd olika ämnen som på olika sätt kan bidra till att skapa en bra miljö för hybridomceller i ett serumfritt medium.För att få en klarare bild av de olika förslagen har de jämförts. Vi menar att de ämnen som är komponenter i det basala mediet Ham F-12 bör prioriteras då det används som standard vid odling av en bred grupp av celltyper. Denna grupp inkluderar linolsyra, putrescin, tymidin, hypoxantin samt liponsyra. Därefter anser vi att återstående lipider (oljesyra och kolesterol) ska prioriteras då de har visats kunna öka både hybridomcellers tillväxt och antikroppsproduktion i ett serumfritt medium. Tillväxtfaktorer, som främst ökar antikroppsproduktionen hos cellerna och i vissa fall även deras livslängd placerar vi på tredje plats i vår rangordning. Övriga ämnen i gruppen ?Små biomolekyler? (paraaminobensoesyra och glutation) prioriterar vi sist då de inte är komponenter i Ham F-12 och de inte explicit visats påverka celltillväxten ellerantikroppsproduktionen, men har identifierats i det serumfria mediet IBL media III.