Implementering och verifiering av kvantitativ ELISA för analys av Staphylococcus aureus enterotoxin A och C
Varje år uppskattas en halv miljon svenskar drabbas av matförgiftning och knappt en tredjedelrapporteras ha drabbats av en matförgiftning orsakad av bakterier eller bakteriella toxiner.Under år 2007 drabbades drygt 2500 EU-medborgare av matförgiftning orsakade avstafylokockenterotoxiner (SEs). I livsmedel har man sett att produktion av SEs framförallt ärkopplat till Staphylococcus aureus. Studier har visat att SEA följt av övriga klassiska SEs ärde toxin som oftast orsakar matförgiftningar.Detta kandidatarbete har haft som mål att sätta upp en ELISA för kvantitativ bestämning avstafylokockenterotoxin A och C i BHI-buljong (brain heart infusion) och pastöriserad mjölkmed fetthalt 1,5 %. Ytterligare mål var att fastställa nedre gränsen för att kvantitativtbestämma enterotoxininnehållet med använd ELISA. Detta för att kunna jämföraenterotoxinproduktionen hos S. aureus under olika odlingsbetingelser relevanta för livsmedel.I denna studie valde vi att använda en ELISA som baseras på en metod för kvantifiering avSEA och SED som utarbetats av Schelin och Rådström vid Lunds Tekniska Högskola.Metoden har dock inte tidigare testats med avseende på SEC.Analysprincipen för ELISA:n var att SEs band till specifika antikroppar som bundits tillbrunnarna på en mikrotiterplatta. Därefter tillsattes biotinylerade antikroppar, NeutrAvidinkopplatalkaliskt fosfatas och p-nitrofenylfosfat vilket resulterade i att de brunnar sominnehöll SE fick ett färgomslag. Intensiteten i färgen var proportionell mot mängden SE. Enlinjär standardkurva upprättades med hjälp av en rad prover med kända SE-koncentrationer.Toxinnivåerna i de okända proverna beräknades sedan utifrån standardkurvan. Nedrekvantifieringsgräns bestämdes till 0,313 ng/ml för SEA och 0,156 ng/ml för SEC.Resultaten visar att använda stammar, odlade över natt vid 37 °C, producerar SEA i såvälBHI-buljong som pastöriserad mjölk, men att nivåerna är lägre i mjölk. Även produktion avSEC sker i BHI-buljong medan endast mycket begränsade mängder bildas i mjölk. Resultatentyder på att odlingsmediet, antalet inokulerade bakterier och genetiska faktorer har betydelseför toxinbildningen.