Effekter av vanadin föreningar på fosfatas i olika celler
Enligt tidigare undersökningar har vanadinföreningar visat sig ha insulinliknande effekter både in vitro och in vivo. Syftet med detta examensarbete var att prova ut en teknik för att testa effekten av vanadinföreningar på två olika celltyper: adherenta celler (AA-celler) och suspensionsceller (K562-celler). När insulinet binder till sin receptor på cellytan är det starten på en biologisk respons. Insulinreceptorn är ett tyrosinkinas som transporterar fosfatgrupper från ATP till tyrosin på sin egen peptidkedja. De aktiverade tyrosinkinasreceptorn kan aktivera ett antal signalmolekyler, bland annat proteinkinas B. Tyrosin som är fosfolyserat, defosfolyseras senare av proteinet tyrosinfosfatas (PTP). Insulinets signaleringsvägar är kontrollerade av omvändbar fosforylerings reaktioner. Patogenesis av insulinresistens i typ 2-diabetes och övervikt är sammanlänkade av den normala signaleringens responsen till insulin. I denna studie undersöktes effekten av vanadat och ett antal ligander som bildar komplex med vanadat. Den största vikten lades vid att undersöka vilka koncentrationer av ämnena som var icke-toxiska vid cellodling och därmed inte leder cellerna till apoptos. Först testades att föreningarna inte gav ändring i pH . Därefter testades deras effekter på celler. Med endast vanadat observerades celltoxina effekter vid koncentrationer över 1µM. I nästa steg behandlades AA-cellerna med fyra olika koncentrationer av vanadat tillsammans med olika ligander. K562-celler behandlades bara med vanadat och ligand 2. Resultaten visar att koncentrationer upp till och med 1µM vanadat inte hade några negativa effekter på cellerna. Varken apoptos eller onormal minskning i antal celler observerades. Slutligen testades effekter av vanadatföreningarna på PTP aktiviteten i odlade celler. I kitet som användes fanns detektorn ?Green Reagent? som kan identifiera fritt fosfat genom färgändring från gul till grön. Cellerna behandlades med vanadat och efter 24 timmar gjordes en cellextraktion. Cellextrakten späddas 10 gånger, sedan tillsattes detektorn Green Reagent efter 15 min. Analys gjordes med hjälp av en Elisa-läsare. Resultaten visar att med ökande koncentration av vanadat påverkades cellerna så att PTP 1B aktiviteten ökades. Detta är ett intressant resultat i ljuset av att vanadat rapporterats ha insulinliknande effekt. En tänkbar förklaring är att defosforyleringen av insulinreceptorn krävs för att aktivera insulin responsen i celler.