Sökresultat:
2 Uppsatser om PQlacZ-1 - Sida 1 av 1
Konstruktion av en mindre variant av plasmiden pQlacZ-1
Syftet med detta projekt var att konstruera en mindre variant av PQlacZ-1 för att senare kunna använda den som reportervektor i Ideonella dechloratans. PQlacZ-1 är en plasmid som är 17,1 kbp stor, som skulle kunna användas som reportervektor i Ideonella dechloratans för att kunna undersöka olika promotorsekvenser. Detta är möjligt eftersom PQlacZ-1 är en broad host range plasmid och saknar promotorsekvensen för lacZ genen. Ett problem med PQlacZ-1 är dess storlek vilket gör den svår att transformera, och då speciellt i Ideonella dechloratans som är svår att transformera överhuvudtaget. En stor del av projektet har lagts på att ta reda på hur PQlacZ-1 ser ut i detalj, då detta inte finns väl beskrivet.
Konstruktion av reporterplasmider innehållande möjliga promotorregioner för kloratreduktas respektive kloritdismutas från Ideonella dechloratans
Ideonella dechloratans är en av flera isolerade bakteriestammar med förmågan att använda klorat i sin metabolism i anaerob miljö. Detta kan utnyttjas inom exempelvis pappersindustrin där klorat är en miljöfarlig restprodukt efter klordioxidblekning. Klorat och perklorat har visat sig ha negativa effekter hos både människor, djur och växter vilket ger ett stort behov av mer forskning på förbättrade reningsmetoder. Kan genregleringen av enzymerna som sköter nedbrytningen av klorat, kloratreduktas och kloritdismutas, förbättras genom att exempelvis fungera även i aerob miljö så skulle reningen förbättras samt kostnader dras ner. Genom att införa promotorregionerna för kloratreduktas och kloritdismutas i en broad-host-range reporterplasmid, PQlacZ-1, så kan dessa testas i flera olika förhållanden och i olika typer av gramnegativa bakterier. Genom dubbelklyvning av PQlacZ-1 med BamHI och EcoRI så har PCR produkter av Clrp och Cldp från Ideonella dechloratans kunnat ligeras in för att sedan transformeras in i E. coli, XL-1 Blue. Gelextraktion har visat sig vara den effektivaste reningsmetoden inför ligering men utförligare screening behöver göras på transformanterna för att säkerställa metodens effektivitet..